肌纤维ATPase染色液

肌纤维ATPase染色液

产品简介：

   三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一种水解酶，是催化 ATP 合成的一种酶，三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase 能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键，因而释放大量能量，其催化反应如下：

A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量

肌纤维ATPase染色液的原理是三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和

磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴和硫化钴，终产物为黑色硫化钴沉淀，可区分 I(红肌)、IIa(白肌)、IIb(白肌)。    

产品组成：

名称                       规格            Storage

试剂(A): 酸性孵育液         50ml             4℃

试剂(B): 碱性孵育液         50ml             4℃

试剂(C): ATPase 孵育液      50ml             4℃

试剂(D): 钙盐溶液           100ml            RT

试剂(E): ATPase 钴溶液      50ml             RT

试剂(F): BBTN 缓冲液        250ml            4℃

试剂(G): ATPase 硫化溶液    2×1ml           RT 避光

使用说明书 1 份

自备材料：

1、蒸馏水

2、恒温箱

3、中性福尔马林固定液

操作步骤(仅供参考)：

1、 取新鲜组织，低温恒冷冰冻切片(用液氮快速冷冻效果更佳)，厚度6μm，连续切片贴于玻片上，分别命名为A玻片、B玻片，凉风吹干30min。

2、 取A玻片浸入酸性孵育液，室温孵育5min。

3、 取处理过的A玻片以及B玻片，分别浸入碱性孵育液室温孵育30s、15min。

4、 将A玻片以B玻片浸入ATPase 孵育液，室温孵育35~60min。

5、 入钙盐溶液浸洗 3 次，每次3min。

6、 入ATPase钴溶液孵育3min。

7、 用BBTN 缓冲液洗涤4~5 次，每次1~2min，流水冲洗 1min。

8、 在上述过程中配制ATPase 硫化工作液，即取 ATPase 硫化溶液用蒸馏水稀释50倍, 即为ATPase 硫化工作液，即配即用。

9、切片入硫化工作液，孵育 1min。

10、流水洗 10min，常规脱水透明，中性树胶封固。

染色结果：

ATPase 主要呈黑色或棕黑色。

肌纤维类型       酸性孵育液       碱性孵育液

I(红肌)            深                 淡

IIa(白肌)          淡                 深

IIb(白肌)         中度                深

注意事项：

1、 ATPase 孵育液、ATPase 硫化液易失效，好分成小分储存，一经开启立即使用。

2、 ATPase 硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。

3、 冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

4、 染色效果与酸性孵育液、碱性孵育液、ATPase 孵育液的 pH变化有很大关系，尽量减少改变pH的因素，如避免反复开盖、避免室温放置过久等。

有效期：6个月有效。