葡萄糖含量试剂盒说明书（测组织、细菌或细胞）

葡萄糖含量试剂盒说明书（测组织、细菌或细胞）

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物

可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组

织等的能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

测定原理：

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化

4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm 有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水

试剂的组成和配制：

试剂一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 10ml×1 瓶，4℃保存；（若出现结冰现象，可37℃水浴溶解后使用）

葡萄糖提取：

1、组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g

组织，加入1mL 蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，

8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

2、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴

个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水），

超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30 次），95℃

水浴10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2、混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三1:1 等体积混合，用多少配多少。

3、加样表（在EP 管或96 孔板中加入下列试剂）：

混匀，置37℃（哺乳动物）或25'C（其它物种）保温15min 后，于505nm 波长处读取吸光

度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为A1、A2 和A3。空白管和标准管只要做一管。

葡萄糖含量计算：

1、按样本蛋白浓度计算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷Cpr。

2、按样本鲜重计算

葡萄糖含量（µmol/g 鲜重）= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷W

3、按细菌或细胞密度计算

葡萄糖含量（µmol/ 10⁴ cell)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷

(A2-A1)

C 标准：标准管浓度，0.5µmol/mL；V1：加入样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，

1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

注意：

1、低检测限为 50nmol/g 鲜重或 0.5nmol/mg prot。

2、若样本中存在葡萄糖氧化酶抑制剂，则会造成测定结果偏低，建议改用 HPLC 法测定。