分享几点操作层析柱的建议

　　层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外，直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000。

　　1 使用前首先明确自己的分离目的，即要做哪一方面的分离，从而选择合适的凝胶填料，尤其对于没有成熟工艺的学生和研发人员，请大家务必查阅文献或者询问老师，同时根据自己的分离要求，选择合适长度和直径的层析柱；  

　　2 选择好层析柱和填料以后，严格按照填料的要求来操作，包括填料的溶胀、脱气、装柱，期间务必严格按照说明书操作；

　　3 适当控制上样量,上样以前务必要过0.22µm滤膜；

　　4 选择合适的流动相，根据胶的性质决定能否用泵加压；

　　7 使用完毕后，请将层析柱做好处理（离子交换柱请用高浓度氯化钠溶液冲洗，后用水冲洗），后将层析柱堵好，以防干胶或者进气泡，同时请做好试验纪录，以便下一位同学用时方便查询使用情况；

　　8 试验过程中所有用水或者溶液必须经过抽滤和脱气，严防气泡。