粪便DNA 分离试剂盒产品说明书

主要用途

 粪便DNA 分离试剂是一种旨在直接从各种粪便（人体、动物等）中提取细胞或细菌DNA，有效地去除各种污染物（蛋白或核酶）和抑制剂（PCR 多聚酶抑制剂等）的经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其应用于即时 PCR、RLPF 分析、测序、杂交、遗传鉴定、突变分析、性别鉴定、司法鉴定等。产品即到即用，性能稳定，操作简单，纯度产量高，重复性好。

技术背景

粪便中含有许多污染成分，降解DNA和抑制PCR反应。通过冷冻处理、化学缓冲、孵育温度、大剂量特级

酶、十六烷基*基溴化铵（cetyltrimethyl－ammonium bromide；CTAB）纯化、异硫氰酸胍（GuSCN）处理、特别萃取等技术方法有效地去除各种干扰因子。

产品内容

 缓冲液（Reagent A） 毫升

 增强液（Reagent B） 毫升

 分离液（Reagent C） 毫升

 酶解液（Reagent D） 毫升

 萃取液（Reagent E） 毫升

 浓缩液（Reagent F） 毫升

 沉淀液（Reagent G） 毫升

 清理液（Reagent H） 毫升

 保存液（Reagent I） 毫升

产品说明书                   1 份

保存方式

保存 增强液（Reagent B）、 酶解液（Reagent D）和 萃取液（Reagent E）在

－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6 月

用户自备

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

2 毫升离心管：用于DNA 纯化操作的容器

1.5 毫升离心管：用于保存DNA

台式离心机（例如EPPENDORF5810）：用于沉淀杂质

微型台式离心机（例如EPPENDORF5415）：用于沉淀核酸

涡旋震荡仪：用于混匀反应物

恒温水槽：用于孵育反应物

实验步骤

实验开始前，将增强液（Reagent B）、酶解液（Reagent D）和萃取液（Reagent

E）从－20℃冰箱里取出，放入冰槽里融化。然后进行下列操作：

一、 粪便细胞DNA 萃取

1． 秤取300 毫克的粪便样品放进15 毫升锥形离心管

2． 放入－70℃冰箱里过夜

3． 加入xx 毫升 缓冲液（Reagent A）到15 毫升锥形离心管

4． 室温下静置15 分钟

5． 强力涡旋震荡，直至固态物质充分混匀（此步骤重要）

6． 放进台式离心机离心30 分钟，速度为3000g

7． （选择步骤）小心移出上清液到15 毫升锥形离心管

8． （选择步骤）放进台式离心机离心30 分钟，速度为3500g

9． 小心移出500 微升上清液到新的2 毫升离心管

10．加入xx 微升 分离液（Reagent C）（注意：使用前，先摇匀 分离液（Reagent C））

11．加入xx 微升 酶解液（Reagent D）（注意：使用前，先混匀 酶解液（Reagent D））

12．涡旋震荡15 秒

13．放进60℃恒温水槽孵育30 分钟（注意：可以增加孵育时间至2 小时，增加DNA 产量）

14．放进微型台式离心机离心20 秒，速度为400g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）

15．（选择步骤）放进微型台式离心机离心10 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）（注意：强化去除有色杂质：白色、黄色、棕色等）

16．（选择步骤）小心移出上清液到新的2 毫升离心管（注意：留下100 微升液体）

17．加入xx 毫升 萃取液（Reagent E）（注意：使用前，先摇匀 萃取液（Reagent E））

18．涡旋震荡30 秒

19．放进微型台式离心机离心15 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

20．移出xx 微升上层液相溶液到新的1.5 毫升离心管（注意：不要触碰相位交界面）

21．加入xx 微升 浓缩液（Reagent F）

22．加入xx 微升 沉淀液（Reagent G）

23．上下翻转10 至15 次，混匀

24．静置5 分钟

25．放进微型台式离心机离心15 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

26．小心抽掉上清液

27．加入xx 毫升 清理液（Reagent H）

28．放进微型台式离心机离心5 分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

29．小心抽掉上清液

30．空气中晾干

31．加入xx 微升 保存液（Reagent I），溶解

32．移出适量DNA 溶液进行后续PCR 反应或保存在－20℃冰箱里

二、 粪便细菌DNA 萃取

1. 秤取300 毫克的粪便样品放进15 毫升锥形离心管

2. 放入－70℃冰箱里过夜

3. 加入 xx 毫升  缓冲液（Reagent A）到 15 毫升锥形离心管

4. 室温下静置 15 分钟

5. 强力涡旋震荡，直至固态物质充分混匀（此步骤重要）

6. 煮沸 5 分钟

7. 室温下静置 15 分钟

8. （选择步骤）加入 xx 微升  增强液（Reagent B）

9. （选择步骤）涡旋震荡 15 秒

10. （选择步骤）放进 37℃恒温水槽孵育 2 小时

11. 放进台式离心机离心 30 分钟，速度为 3000g

12. （选择步骤）小心移出上清液到 15 毫升锥形离心管

13. （选择步骤）放进台式离心机离心 30 分钟，速度为 3500g

14. 小心移出 500 微升上清液到新的 2 毫升离心管

15. 加入 xx 微升  分离液（Reagent C）（注意：使用前，先摇匀  分离液（Reagent C））

16. 加入 xx 微升  酶解液（Reagent D）（注意：使用前，先混匀  酶解液（Reagent D））

17. 涡旋震荡 15 秒

18. 放进 60℃恒温水槽孵育 30 分钟（注意：可以增加孵育时间至 2 小时，增加 DNA 产量）

19. 放进微型台式离心机离心 20 秒，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）

20. （选择步骤）放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例 如 eppendorf 5415）（注意：强化去除有色杂质：白色、黄色、棕色等）

21. （选择步骤）小心移出上清液到新的 2 毫升离心管（注意：留下 100 微升液体）

22. 加入 xx 毫升  萃取液（Reagent E）（注意：使用前，先摇匀  萃取液（Reagent E））

23. 涡旋震荡 30 秒

24. 放进微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

25. 移出 900 微升上层液相溶液到新的 1.5 毫升离心管（注意：不要触碰相位交界面）

26. 加入 xx 微升  浓缩液（Reagent F）

27. 加入 xx 微升  沉淀液（Reagent G）

28. 上下翻转 10 至 15 次，混匀

29. 静置 5 分钟

30. 放进微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

31. 小心抽掉上清液

32. 加入 xx 毫升  清理液（Reagent H）

33. 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

34. 小心抽掉上清液

35. 空气中晾干

36. 加入 xx 微升  保存液（Reagent I）溶解

37. 移出适量 DNA 溶液进行后续 PCR 反应或保存在－20℃冰箱里

注意事项

1． 本产品为 10 次（4 至 10 克样品）或 50 次（100 至 300 毫克样品）操作

2． 操作时，须戴手套

3． 建议粪便样品收集后，即刻放进－70℃冰箱里长期储存，避免反复冻融

4． 收集粪便样品时，避免不必要的污染

5． 粪便固态物质充分混匀后，可以放进－70℃冰箱里长期储存，但建议只需冻融一次

6． 粪便样品量为 100 至 300 毫克；如果用户需要从大量粪便中提取，可以按比例相应增加操作量即可

7． 为了确保萃取效果，建议完成选择步骤的操作

8． 通常 300 毫克样品可以提取 20 微克左右 DNA 量；但不同样品，存在很大差异（5 至 100 微克）

9．  分离液（Reagent C）和  酶解液（Reagent D）易形成晶状体，使用前可 37℃温育融化

10．如果粪便中含有特殊干扰因子，建议使用  粪便 DNA 高质纯化试剂盒-GMS20011.4

11．本公司提供系列粪便核酸纯化试剂产品