总胆固醇（TC）检测试剂盒（邻苯二甲醛比色法）

产品简介：

胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式 C₂₇H₄₆O，

分子量为 3860.65，胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织丰富，在肾、脾、皮

肤、肝和胆汁中含量也较高。

      总胆固醇(TC)检测试剂盒(邻苯二甲醛比色法)检测原理是胆固醇及其脂在强酸存在下与邻苯二甲醛反应，产生紫红色化合物，该化合物在 550nm 波长处有大吸收峰，分光光度计在 550nm 处进行比色测定，胆固醇含量在 4mg/ml 之内与吸光度呈良好线性关系。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定，其优点是：1、操作简便；2、灵敏；3、稳定；4、无需将胆固醇单独抽提出来或去除样品中的蛋白质。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

  产品组成：

试剂(A): 胆固醇标准(1mg/ml)     1ml 4℃ 避光

试剂(B): TC Assay Buffer            100ml RT

试剂(C): 邻苯二甲醛粉剂            2×10mg 4℃ 避光

试剂(D): 邻苯二甲醛稀释液          30ml RT

使用说明书 1 份

自备材料：

1、 蒸馏水

2、 生理盐水或 PBS

3、试管或离心管

4、 浓硫酸

5、 分光光度计

操作步骤(仅供参考)：

1、 样本处理：

①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如

超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。

②细胞样本：

a、取适量的细胞(一般推荐>10⁶ 以上)，1000g 离心 10min，弃上清，留取沉淀。

b、用 PBS 或生理盐水清洗 1~2 次，1000g 离心 10min，弃上清，留取沉淀。

c、加入 200~300μl 的 PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率 300W，每

次 3~5s，间隔 30s，重复 3~5 次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心；亦可用 1~2%

Triton X-100 冰浴 30~60min，制备好的裂解液不可离心。

③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水=1：4 的比例，加入生理盐水，

冰浴条件下手动或机械匀浆，2500~3000g 离心 10min，取上清待用。

2、配制胆固醇标准工作液：按胆固醇标准(1mg/ml)：TC Assay Buffer=1：9 的比例准确

混合，即为胆固醇标准工作液(0.1mg/ml)，然后按下表依次稀释胆固醇标准工作液。

加入试剂(ml)/管号                      0     1     2     3     4

胆固醇标准工作液(0.1mg/ml)     0 0.06 0.12 0.18 0.24

TC Assay Buffer                         0.24 0.18 0.12 0.06 0

总胆固醇浓度(mg/ml)                  0     1    2     3     4

3、配制邻苯二甲醛工作液：取 1 瓶(10mg)邻苯二甲醛粉剂的准确加入邻苯二甲醛稀释液

10ml，充分混匀，即为邻苯二甲醛工作液。4℃避光保存，2 周有效。

4、配制强酸工作液：取适量的 TC Assay Buffer 和浓硫酸等量混合，即为强酸工作液。注

意：本试剂盒不提供浓硫酸，需用户自备，二者混合时一定小心操作，以免误伤自己，配制

好的强酸工作液中的硫酸含量应准确，否则有可能影响显色效果。

5、胆固醇加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注

意避免产生气泡。

加入试剂(ml)                                空白管 标准管 测定管

蒸馏水                                              0.006 0.006     -

系列胆固醇标准工作液(0~4 号)            -      0.24      -

待测血清或其他样本                          -          -      0.006

TC Assay Buffer                                     0.24  -       0.24

邻苯二甲醛工作液                                  0.12   0.12    0.12

强酸工作液                                             2.4      2.4       2.4

6、胆固醇测定：充分混匀, 静置 10min，1cm 比色杯，以分光光度计测定 550m 吸光度，

以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。

计算：以系列胆固醇浓度(0~4 号)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，作标准曲线，以

测定管的吸光度照标准曲线，求出待测样本的浓度。

注意事项：

1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2、 本法可直接用于检测脑脊液中的 TC 含量，也可直接检测尿液中的 TC 含量。

3、 待测样本如不能及时测定，应置于 2~8℃保存，3 天内稳定。

4、 如果样本 TC 浓度过高，结果可能呈假性降低，应用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀

释倍数。

有效期： 6 个月有效。常温运输，4℃保存。