组织活性氧（ROS）检测试剂盒

   活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
   组织活性氧检测试剂盒是一种利用新型荧光探针O13进行组织活性氧检测的试剂盒。本试剂盒中的O13 ROS探针为红色荧光的活性氧探针，具有510/610nm的大激发/发射波长。

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● O13染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
● 选做，阳性对照诱导剂可以按照1:1000的比例使用。例如标记好探针的细胞共1毫升，可以加入1μl的阳性对照诱导剂刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照诱导剂的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照诱导剂的浓度。
样本处理：
1．刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。
2．准确称取50mg组织，加入1ml匀浆缓冲液A，用玻璃匀浆器充分匀浆。
3．在1000g，4℃离心10分钟，弃沉淀，取上清。
样本检测：
1．在96孔板中加入190μl匀浆上清液、10μlO13探针，用移液器吹打，使之充分混匀。
【注】：
● 选做：如有必要，可以做一个阳性对照，匀浆上清加入探针后再加入10μl阳性对照。
2．在37℃避光孵育30分钟。
3．置于荧光酶标仪中，后于激发波长为488-535nm、发射波长610nm检测荧光强度。
蛋白定量：
1．另取50μl上清匀浆液，用PBS大约稀释30倍。
2．取100μl进行蛋白定量。
结果处理：
以荧光强度/毫克蛋白表示组织活性氧强度。

产品特点：
● 使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或荧光酶标仪激发波长488-535nm，发射波长610nm。
● 离心机● 移液器● 冰箱● 冰盒
试剂：
● PBS缓冲液(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液
●或者HBSS(With：Calcium Magnesium Glucose；Without：Phenol Red。)
●蛋白定量试剂
耗材：
● 离心管● 吸头