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腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏微板法)

更新时间:2020-09-14 点击次数:965

腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏微板法)

      腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase,ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类,属于一种巯基酶,每分子至少含 2 个活性巯基,ADA 能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷,再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤,其代谢缓和终产物为尿酸,广泛分布于人体各组织中,以    胸腺、脾和其他淋巴组织中含量高,而肝、肺、肾和骨胳肌等含量低。

      腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)其检测原理是待测样品中的 ADA 催化腺嘌呤核苷水解脱氨,产生次黄嘌呤核苷和铵离子,利用波氏显色法测定氨离子生成量,    其反应公式为:腺苷+H2O次黄嘌呤+NH3,通过分光光度法(酶标仪)测定 640nm 处吸光度,根据计算公式可得 ADA 活力,100T 试剂盒可测 50~55 个样品。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 产品组成:

编号

名称

JSK0231

100T

Storage

试剂(A): 氨氮标准(1mg/ml)

1ml

4℃

试剂(B): 底物缓冲液

1.5ml

4℃

试剂(C): 波氏 ADA 显色液

15ml

4℃ 避 光

试剂(D): ADA Assay buffer

15ml

4℃ 避 光

试剂(E): ddH2O

50ml

RT

使用说明书

 

 

自备材料:

1、离心管或小试管

2、水浴锅

3、96 孔板

4、酶标仪

操作步骤(仅供参考)

1、准备样品:

①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃    冻存,用于 ADA 的测定。

②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃冻存,用于 ADA

的测定。

③高活性样品:如果样品中含有较高活性的 ADA,可以使用 ddH2O 稀释。

④(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 ADA 含量。

2、稀释标准品:用 ddH2O 准确稀释氨氮标准(1mg/ml)至 25μg/ml,即为氨氮标准工作液,4℃保存备用。

3ADA 加样:按照下表设置空白孔、标准孔、对照孔、测定孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后    再进行测定。

加入物(μl)

空白孔

标准孔

对照孔

测定孔

ddH2O

5

氨氮标准工作液(25μg/ml)

5

待测样品(如血清等)

5

5

底物缓冲液

12.5

12.5

12.5

混匀,37℃准确水浴 60min。

底物缓冲液(ml)

12.5

波氏 ADA 显色液

125

125

125

125

ADA Assay buffer

125

125

125

125

混匀,37℃水浴显色 30min。

4、ADA 测定:以 ddH2O 调零,酶标仪 640nm 处测定吸光度(分别为 A空白A对照A

准、A测定)。

计算:

ADA 活性单位的定义:在 37℃ 1ml 血清中 ADA 1h 催化底物产生 1μg 氨氮为一个ADA 酶活力单位。

血清、血浆中 ADA 活力(U/L)=(A测定-A对照)/(A标准-A空白)×25

组织中 ADA 活力(U/mg)=[(A测定-A对照)/(A标准-A空白)×25]/待测样品的蛋白浓度(mg/ml) 式中:

A测定=测定孔的吸光度

A对照=对照孔的吸光度

A标准=标准孔的吸光度

A空白=空白孔的吸光度

注意事项: 

1、 稀释样品和研磨样品所用水,均应为 ddH2O,不可为普通的水。

2、 如果采用单位,需在测得活力单位基础上乘以 1.19。

3、 如果没有酶标仪,也可用分光光度计测定,但应注意加入试剂量不同,相应的检测次数会大大减少。

4、 采用分光光度计未调零情况下,Leagene 空白参考范围在 0.05~0.09 之间,25μg/ml 标准参考范围在 0.13~0.18 之间,由于仪器设备、操作方法以及工作环境不同,参考范围会有差异。

5、 该试剂盒测定下限在 2~5μg/ml 之间,测定上限在 70~90μg/ml 之间;从肉眼观察, 一般情况下浓度在 15~30μg/ml 即可显淡蓝色;浓度≤15μg/ml 可显淡黄色;浓度

≥30μg/ml 可显蓝色,一般情况下接近上限比接近下限更准确。

6、 胸水标本经离心后取上清,置于 4℃保存备用,ADA 活性可稳定 1 周。

7、 血清样本应避免溶血,4℃保存 3 天。

有效期:6 个月有效。4℃运输,4℃保存。

联系方式

邮件:jskangchina@163.com
地址:山东青岛市青大工业园韩海路
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