细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒

技术背景

细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。

产品内容

清理液（Reagent A）     毫升

固定液（Reagent B）   毫升

酸性液（Reagent C）       毫升

稀释液（Reagent D）   毫升

染色液（Reagent E）   毫升

产品说明书          1份

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月

用户自备

2毫升离心管：用于配制染色工作液

15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液

恒温培养箱：用于染色孵育

光学显微镜：用于观察染色后的细胞

实验步骤

操作一、25cm²细胞培养瓶染色

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

• 小心抽去25cm²细胞培养瓶里的培养液
• 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
• 小心抽去清理液
• 小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心抽去固定液
• 小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面
• 小心抽去酸性液
• 重复实验步骤7和8一次
• 小心加入xx毫升染色工作液，覆盖整个细胞表面
• 放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）
• 在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。

操作二、24孔细胞培养板染色

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升锥形离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作。

1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

2．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液

4．每孔加入xx微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面

5．在室温下孵育5分钟

6．小心抽去固定液

7．每孔加入xx微升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面

8．小心抽去酸性液

9．重复实验步骤7和8一次

10．每孔加入xx微升染色工作液，覆盖整个细胞表面

11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）

12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色

注意事项

• 本产品为100次（4个24孔板）或20次（20个25cm²细胞培养瓶）操作
• 操作时，须戴手套
• 本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到优化
• 使用时，避免污染母液，否则出现絮状沉淀，影响实验效果
• 染色工作液避免光照
• 细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24小时
• 细胞染色长孵育时间为24小时
• 孵育时避免液体蒸发
• 本产品染色敏感，甚至对于微弱表达的酶活性仍然显色清晰；用户可以根据实际情况调整孵育时间和染色工作液浓度，使染色恰到好处
• 细胞呈现蓝色的部位为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方
• 染色后的细胞样品可以在4℃冰箱里长期保存，同样须避免光照
• 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：

• 本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品