食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

     食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂是一种旨在通过有机氮自由基染料DPPH的参与，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜组织（动物、人体、昆虫等）的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

产品内容

清理液（Reagent A）     毫升

缓冲液（Reagent B）     毫升

染色液A（Reagent C1）     瓶

染色液B（Reagent C2）     毫升

标准液（Reagent D）     微升

产品说明书     1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

50毫升烧杯：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器

4℃台式离心机：用于样品操作

96孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

• 样品准备

1、固态食品处理

• 秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯，杯口封口膜密封
• 加入xx毫升清理液（Reagent A）
• 搅拌30分钟，充分混匀
• 继续加入清理液（Reagent A）到终容量为10毫升
• 过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒
• 封口膜封口备用

2、液态食品处理

• 移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为1500g
• 移取上清液到新的15毫升锥形离心管
• （选择步骤）可以加入适量的清理液（Reagent A） 
• （选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈）
• 置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存

二、标准液准备

• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 移取xx微升标准液（Reagent D）到1号管
• 小心移取xx微升缓冲液（Reagent B）和xx微升标准液（Reagent D）到2号管，混匀
• 小心移取xx微升缓冲液（Reagent B）和xx微升标准液（Reagent D）到3号管，混匀
• 小心移取xx微升缓冲液（Reagent B）和xx微升标准液（Reagent D）到4号管，混匀
• 小心移取xx微升缓冲液（Reagent B）到5号管
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

三样品测读

实验开始前，将－20冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，移取xx毫升染色液B（Reagent C2）到xx瓶染色液A（Reagent C1）里，混匀，置于暗室里，标记为染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。

• 准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔
• 分别移取xx微升缓冲液（Reagent B）到96孔板里的每个孔里
• 分别加入xx微升染色工作液 
• 加入xx微升缓冲液（Reagent B）到空白对照孔
• 加入xx微升上述配制的标准液（Reagent D）到相应标准对照孔里
• 加入20微升裂解样品（100微克食品总量）到样品孔里
• 轻轻摇动96孔板，使其混匀
• 室温下孵育15分钟
• 即刻放进酶标仪里测读：515nm波长
• 分析结果：
  • 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓度（微摩尔/升）
  • 空白对照孔为大吸光单位（OD515nm）读数
  • 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD515nm）读数
  • 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）
  • 计算样品实际总抗氧化能力
• 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）
• IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微升）

注意事项

• 本产品为50次操作
• 本产品测试范围为25至800微摩尔Trolox等值
• 操作时，须戴手套
• 样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行
• 测试前，样品须新鲜收集
• 样品须清澈
• 空白对照孔的吸光读数应为1.0左右为佳
• 样品读数越低，抗氧化能力越高
• 可以使用比色皿检测
• 如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品容量或浓度
• 如果测试样品很多，建议使用排枪移液
• 本公司提供系列抗氧化分析试剂产品