检测原理
试剂盒采用双抗原一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被马铃薯Y病毒(PVY)抗体的包被微孔中,依次加入标本、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中马铃薯Y病毒(PVY)的存在与否。
样品收集、处理及保存方法
1. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
2. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
3. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
操作注意事项
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
阴性对照
0.5mL
阳性对照
检测抗原-HRP
10mL
5mL
20×洗涤缓冲液
25mL
15mL
按说明书进行稀释
样本稀释液
6mL
3mL
底物A
底物B
终止液
封板膜
2张
说明书
1份
自封袋
1个
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
操作步骤
结果判断
1. 试验有效性:阳性对照孔OD值平均值≥1.00;
阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
2. 临界值(Cut off)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断:样品OD值<临界值(Cut off),样品为阴性
4. 阳性判断:样品OD值>临界值(Cut off),样品为阳性
试剂盒性能
免责声明
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