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血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒说明书

更新时间:2021-04-12 点击次数:1469

产品简介

      本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和*的缓冲液系统,提取多种细胞中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料,高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA段大,纯度高,质量稳定可靠。

    使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

产品特点:

简单快速:1 h内即可获得超纯的基因组DNA

广 泛:适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。

纯:获得的DNA纯度高,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1. 使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。

2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA段较小且提取量也下降。

3. 若缓冲液GAGB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。

4. 所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心。

 操作步骤

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

1. 处理材料

a. 如提取材料为血液,可直接使用200 μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液,不足200 μl

可加缓冲液GA补足;

注意:如需处理更大体积血液,如300 μl-1 ml,应按以下步骤操作:在样品中加入3倍体积红细胞裂解液 (例如,300 μl血液加入900 μl红细胞裂解液),颠倒混匀, 室温放置5 min,期间再颠倒混匀几次。10000 rpm(~11,500×g)离心1 min(若离心机高转速不允许,可3000 rpm(~3,400×g)离心5 min),吸去上清,留下白细胞沉淀,加200 μl缓冲液GA,振荡至*混匀。

红细胞裂解液本公司另外有售(目录号:RT122),可根据需要来决定购买。

b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量5-20 μl,可加缓冲液GA补足200 μl后进行下面的裂解步骤。

c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液,然后10,000 rpm(~11,200×g)离心1 min,倒尽上清,加200 μl缓冲液GA,振荡至*悬浮;

d. 动物组织(脾组织用量应少10 mg)应先打碎处理为细胞悬液,然后10,000 rpm(~11,200×g)离心1 min,倒尽上清,加200 μl缓冲液GA,振荡至*悬浮。

注意:如果需要去除RNA,可加入4 μl RNaseA100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:RT405-12),振荡15 sec,室温放置5 min

2. 加入20 μl Proteinase K溶液,混匀。

a. 提取血液基因组时,只需加入Proteinase K混匀,即可继续进行下一步。

b. 提取细胞基因组时,只需加入Proteinase K混匀,即可继续进行下一步。

c. 提取组织基因组时,加入Proteinase K混匀后,在56℃放置,直至组织溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。

注意:不同组织裂解时间不同,通常需1-3 h即可完成(鼠尾需要消化过夜)。不会影响后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次,用水浴振荡器也可。

3.加入200 μl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不*,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200 μl且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶液中没有团块等沉淀。

4.加人200 μl 无水乙醇,充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3吸附柱放入收集管中 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。

6.向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD 使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。

7.向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW使用前请先检查是否已加入无水乙醇 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。

8.. 重复操作步骤7

9.将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以*晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。

10.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 min,将溶液收集到离心管中。

注意:洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为增加基因组DNA 的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min

 

 

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