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BD Matrigel基底膜基质胶说明书

更新时间:2021-05-18 点击次数:1859

操作指南

BD采用技术,从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离出BD Matrigel 基底膜基质,其主要成分由层粘连蛋白,Ⅳ型胶原,巢蛋白,硫酸肝素糖蛋白等组成,还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。BD Matrigel基底膜基质在室温条件下,聚合形成具有生物学活性的三维基质,模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能,有利于体外细胞的培养和分化,以及对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达的研究。

BD Matrigel 基底膜基质形成的三维培养基质,可促进上皮细胞、肝细胞、Sertoli细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。同时,Matrigel还能影响乳腺上皮细胞的蛋白表达,支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。高浓度的Matrigel适用于研究体内血管生成和肿瘤细胞迁移及肿瘤模型的建立等。

产品特性

Matrigel基质会有色差变化(淡黄色到深红色),是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的,但是与5%CO2平衡后色差即会减少。冻融后,轻轻摇晃试剂瓶使Matrigel分散均匀。所有操作均需在无菌环境下进行,试剂瓶瓶盖可用70%乙醇擦拭,并自然干燥。应使用预冷的移液器以保证Matrigel呈匀浆状。

细胞可在0.5mm厚度的Matrigel基质层表面生长,也可在1mm厚度的Matrigel三维基质内生长。过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层,可以用于细胞贴壁,但不能用于细胞的分化研究。

注意:可将冻融后的Matrigel分装在多个小管,所有分装均需用预冷的冻存管,迅速冷冻并保存,避免多次冻融。

Matrigel在22-35℃温度环境下快速成胶,因此溶解时在4℃冰上过夜冻融(4度时会随着温度的上升部分成胶)。所有用品在使用前需置于冰浴,必须使用预冷的移液管、吸头及小管操作Matrigel。成胶后的Matrigel可以在4℃24-48小时后重新呈液态。

推荐包被与成胶方法

注意:为了保证Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性,稀释浓度不应低于1:3,可用无血清培养基稀释,Matrigel成胶后立即使用。

薄胶成胶方法:

     1.冻融后,用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

     2.将需要使用的培养板置于冰上,加入浓度为50μL/cm2生长面积的Matrigel基质。

     3.在37℃放置30分钟,即可使用。

厚胶成胶方法:

     1.冻融后,用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

     2.将需要使用的培养板置于冰浴,将培养的细胞与Matrigel基质混合,用移液枪头使其悬浮于基质中。加入浓度为150-200μL/cm2生长面积的Matrigel基质。

     3.在37℃放置30分钟,可成胶。可以加入细胞培养的基质,也可使细胞直接生长在胶表面。

薄层包被方法:

    1.冻融后,用预冷的移液枪头混匀Matrigel基质成匀浆状。

    2.根据使用需要,采用无血清培养基稀释Matrigel基质。根据实验需要确定最佳包被浓度。

    3.将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中,包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下孵育1小时。

    4.去除未结合的Matrigel,用无血清培养基轻轻地冲洗。

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