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福尔根DNA染色液说明书

更新时间:2022-01-24 点击次数:854

产品简介:
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen 法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等,其中经典的是Feulgen 法, 该法是一种经典的酶组织化学法。
 Feulgen Stain 原理在于DNA 经温和的弱酸(例如盐酸)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff 试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有DNA 的部位呈紫红色,紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团,    所以凡含有DNA 的部位就呈紫红色,该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键,因此RNA 用此法处理后则分解,所以该法不适用于证明RNA。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途

产品组成:

        

名称

 

3×50ml

 

Storage

试剂(A): Schiff Reagent

50ml

4℃ 避 光

试剂(B): SO2 水

B1: 弱酸溶液

50ml

RT

B2: 亚硫酸盐溶液

50ml

RT

使用说明书

1 份

自备材料:

1、蒸馏水、系列乙醇

2、恒温箱


操作步骤(仅供参考):

(一)石蜡切片染色

1、 组织固定:Carnoy 固定石蜡切片较好,10%福尔马林亦可,不宜采用 Bouin 固定液。

2、 配制弱酸工作液: 按弱酸溶液:蒸馏水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸馏水, 充分混合,即获得弱酸工作液。

3、 石蜡切片二甲苯或  脱蜡透明液脱蜡至蒸馏水。

4、 入弱酸工作液室温浸洗一下。

5、 切片入预热至 60℃的弱酸工作液,孵育 8min。

6、 切片入室温的弱酸工作液中冲洗 1min,蒸馏水冲洗。7、 切片入 Schiff Reagent,室温避光染色 30~60min。

8、 在上述染色过程中,配制 SO2 水工作液。按弱酸溶液:亚硫酸盐溶液:蒸馏水=1:5:

94 配制,即取弱酸溶液 1 份、亚硫酸盐溶液 5 份、蒸馏水 94 份,充分混合,即配即用。

9、 用新鲜配制的 SO2 水工作液洗切片 3 次,每次 90s。

10、 蒸馏水中洗净,经系列乙醇脱水,二甲苯或  脱蜡透明液透明并封片。(二)冰冻切片染色

1、 冰冻切片预处理:取 1 份乙酸、3 份无水乙醇混合即为固定液,固定 10min。

2、 由无水乙醇脱水—逐级下行—蒸馏水。

3、 配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸馏水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸馏水, 充分混合,即获得弱酸工作液。

4、 余下步骤同上述石蜡切片染色。

阴性对照:将同样切片经上述步骤, 只有步骤 5 改为入室温弱酸工作液,孵育 15min。结果为细胞核 DNA 阴性。

注意事项:

1、 水解时间很重要,并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。

固定液

水解时间(min)

Carnoy 固定液

8min

Helly 固定液

8min

Susa 固定液

18min

福尔马林

8min

Zenker 液

5min

2 注意 Schiff Reagent 的纯净程度,若变浅粉红亦可考虑使用,颜色变红则弃用。3、 去除切片上多余 Schiff Reagent 的方法以 SO2 水洗为好。

4、 应做阴性对照试验。

有效期:6 个月有效。





 




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