石蜡切片神经组织金属锌改良蒂姆（Neo-TIMM）染色试剂盒产品说明书

主要用途

石蜡切片神经组织金属锌改良蒂姆（Neo-TIMM）染色试剂是一种旨在使用新型蒂姆硫化法银染技术，分析存档中的石蜡组织切片里神经系统中含锌神经细胞结构分布的而经典的技术方法。该技术经过精心改良蒂姆（Timm）方法、成功实验证明的。主要适用于石蜡脑组织（海马齿状回门区hilus of dentate gyrus、安蒙氏角 cornu ammonis、大脑皮层、丘脑、杏仁核amygdala nuclei或外周神经组织切片，例如海马（hippocampus）中苔藓纤维区（mossy fiber region）和齿状分子层（dentate molecular layer）等含锌神经细胞体，例如锥体细胞（pyramidal cells）、齿状颗粒细胞（dentate granule cells）等检测。广泛用于脑理生理，尤其是退行性变包括癫痫、自闭症、精神分裂症、脑损伤、脑缺血等疾病的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

产品内容

硫化液（Reagent A）  毫升

固着液（Reagent B）    毫升

脱蜡液（Reagent C）         毫升

补水液A（Reagent D）  毫升

补水液B（Reagent E）  毫升

补水液C（Reagent F）  毫升

清理液（Reagent G）  毫升

染色液A1（Reagent H1）       毫升

染色液A2（Reagent H2）       瓶

染色液A3（Reagent H3）       毫升

染色液B（Reagent I）  微升

产品说明书  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证3月

用户自备

PBS缓冲液：用于灌注

无离子水：用于组织清洗

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

无菌镊子：用于转移动物脑组织

小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器

切片机：用于组织切片

明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片

中性树脂：用于切片封片

光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤

一、 样本固着处理

1． 常规麻醉动物和手术（建议：使用用户自备的4℃预冷的PBS由心脏处灌注约5至10分钟，去除血液直至澄清，肝脏显示灰白）

2． 使用适量的（xx毫升）4℃预冷的硫化液（Reagent A）灌注处理（建议：至少10分钟，肝脏显示发黑）

3． 使用适量的（xx毫升）4℃预冷的固着液（Reagent B）灌注处理

4． 即刻小心取出脑组织（组织显示蓝灰色调）

5． 小心放进xx毫升固着液（Reagent B）里

6． 置于4℃冰箱里浸泡孵育60分钟

7． 转移到xx毫升硫化液（Reagent A）里

8． 置于4℃冰箱里浸泡孵育30分钟

9． 即刻用无菌镊子夹起组织块 

10． 放进用户自备的无离子水清洗2分钟

11． 用绵纸吸干组织快

12． 即刻进行常规4℃冰箱里30%蔗糖脱水过夜和石蜡处理后包埋

13． 取出组织块，进行缓慢石蜡切片为20至100微米厚，并铺片在明胶化载玻片上

二、 脱蜡处理

 1． 取出10片待测的20至100微米厚的石蜡包埋的组织切片 

2． 按下表依次放进小染色缸里孵育

小心移去切片上的清理液（Reagent G）

注意事项

1． 本产品为10次操作，其中20次染色操作

2． 操作时，须戴手套

3． 铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片：第一用毛笔涂刷；第二保持湿润3小时；第三用PARAFIN包裹后压片

4． 切片建议30至50微米，过厚和过薄不利于检测神经细胞

5． 注意操作安全，尤其使用固着液（Reagent B） 

6． 建议使用玻璃染色缸

7． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干

8． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面

9． 整个操作，在避光状态下进行

10． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 

11． 样品染色后保存，避免光照

12． 锌分布参考图像如下：ao（olfactory bulb）：嗅球；cp（caudate putamen）：尾状壳核；am（amygdala）：杏仁体；h（hilus of dentate gyrus）：齿状回门区；s（subiculum of dentate gyrus in mossy fibers）：苔藓纤维齿状回门下脚；IV（IV layer of neocortex）：新皮质IV层 

13． 本公司提供系列神经系统成分染色试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定显色清晰