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组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP) 活性测定试剂盒说明书

更新时间:2022-12-12 点击次数:418

规格:50管/24样

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

测定原理:

在碱性环境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与 4-氨基安替比林和铁氰化反应红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510 nm 吸光度增加速率,来计算AKP 活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体×1 瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品:液体×1 支(EP 管中),2 μ mol/mL 酚标准液,4℃保存。

粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,

加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g 离心 10min,取上清液待测。

2. 血液可直接测定,或者适当稀释后测定。

测定步骤:

1. 分光光度计预热30min,调节波长到510nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30min

3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸馏水,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A空白管。

4. 标准管:取EP管,加入20μL标准品,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm 测定吸光度,记为A标准管。

5. 对照管:取EP管,加入200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀;最后加入20μL上清液,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A对照管。

6. 测定管:取EP管,加入20μL上清液,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于 37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm 测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

规格:50管/24样

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。

测定原理:

在碱性环境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与 4-氨基安替比林和铁氰化反应红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510 nm 吸光度增加速率,来计算AKP 活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体×1 瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品:液体×1 支(EP 管中),2 μ mol/mL 酚标准液,4℃保存。

粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,

加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g 离心 10min,取上清液待测。

2. 血液可直接测定,或者适当稀释后测定。

测定步骤:

1. 分光光度计预热30min,调节波长到510nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30min

3. 空白管:取EP管,加入20μL蒸馏水,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A空白管。

4. 标准管:取EP管,加入20μL标准品,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm 测定吸光度,记为A标准管。

5. 对照管:取EP管,加入200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀;最后加入20μL上清液,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A对照管。

6. 测定管:取EP管,加入20μL上清液,200μL试剂二,200μL试剂三,混匀后置于 37℃水浴中保温15min;加入试剂四600μL,混匀后于510 nm 测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。


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