细胞总游离胆固醇菲律宾（FILIPIN）荧光染色试剂盒产品说明书

主要用途

细胞总游离胆固醇菲律宾（FILIPIN）荧光染色试剂是一种旨在通过荧光染料菲律宾（FILIPIN）特异性与胆固醇结合，形成复合体，并产生蓝色荧光现象的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于各种细胞（动物、人体等）或培养细胞中游离胆固醇分布的检测。广泛用于细胞病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

胆固醇（cholesterol）是一类称之为固醇类（sterols）或聚类异戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多环化合物（polycyclic compound）。其分子式为cholest-5-en-3β-ol。胆固醇以游离（free form）和脂化结合（ester）两种形式广泛存在于所有动物组织中，主要以非脂化形式存在于细胞膜中。在膜功能和脂代谢以及激素合成中起着重要作用。菲律宾（FILIPIN）是一类由四种同分异构体的多烯抗生素（polyene antibiotics）或多马霉素（polyene macrolide）的总称。源自于S. FILIPINENSIS细菌的培养液中。其分子式为C35H58O11，分子量为654.8。菲律宾与游离胆固醇结合形成聚集体或复合物。

产品内容

清理液（Reagent A）  毫升

固着液（Reagent B）  毫升

抗干扰液（Reagent C）  毫升

染色液（Reagent D）  毫升

产品说明书  1份

保存方式

保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

荧光显微镜：用于样品染色后观察分析

实验步骤

一、 样本固着处理

1． 准备1个48孔细胞培养板的细胞或载波片的细胞

2． 小心抽去48孔细胞培养板里的培养液  

3． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面

4． 小心移去清理液（Reagent A）

5． 重复实验步骤3至4二次

6． 小心加入xx微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面

7． 室温下孵育30分钟

8． 小心移去固着液（Reagent B）

9． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗样品表面

10． 小心移去清理液（Reagent A）

11． 重复实验步骤9至10二次

二、样本染色处理

1． 小心加入xx微升抗干扰液（Reagent C），铺满整个样品表面

2． 室温下孵育10分钟

3． 小心移去抗干扰液（Reagent C）

4． 小心加入xx微升染色液（Reagent D），铺满整个样品表面

5． 室温下孵育30分钟，避免光照

6． 小心移去染色液（Reagent D）

7． 小心加入xx微升清理液（Reagent A），清洗样品表面

8． 小心移去清理液（Reagent A）

9． 重复实验步骤7至8二次

10． 小心加入xx微升清理液（Reagent A）

11． 即刻在荧光显微镜下观察：激发波长：340nm；散发波长：430nm――胆固醇阳性呈现蓝色荧光

注意事项

1． 本产品为50次（48孔细胞培养板）操作

2． 操作时，须戴手套

3． 操作时，避免污染母液

4． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

5． 样品染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察 

6． 荧光容易受到光漂白（photobleach），建议使用抗淬灭剂Ⅰ－12058.2

7． 本产品使用载玻片细胞染色后，可用于电镜分析

8． 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：