Bradford蛋白定量试剂盒说明书

产品简介：

Bradford Protein Assay Kit 检测原理是在酸性乙醇溶液中考马斯亮蓝G250与蛋白结合颜色由棕色变为蓝色，在595nm有最大吸收值，检测速度很快，少量样品一般只需10min 即可完成检测，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl，在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、酶标仪或分光光度计、96 孔板或比色杯、电子天平、研钵或匀浆器、离心机、离心管

2、蒸馏水、0.9%NaCl 或PBS

操作步骤(仅供参考)：

1、样品蛋白质的提取：称取新鲜绿豆芽下胚轴(或小麦叶片)0.5~1.0g放入研钵中，加2mL蒸馏水研磨成匀浆，转移到离心管中，再用6mL蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集于同离心管中，在室温(20~25℃)下放置0.5~1h以充分提取，然后4000r/min 离心20min去沉淀，上清液转入10mL容量瓶，以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。

2、取1ml蛋白标准配制液加入到含有 20mg的蛋白标准(BSA)中，充分溶解，后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白标准溶液应-20℃保存。

3、取适量的20mg/ml蛋白标准，用蛋白标准稀释液稀释至终浓度为500μg/ml 或所需浓度，如取25μl 20mg/ml 蛋白标准，加入975μl蛋白标准稀释液，充分混匀，即配制成500μg/ml 蛋白标准溶液。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml 蛋白标准溶解于蔗糖中；一般也可以用 0.9%NaCl或PBS作为溶解BSA稀释液，稀释后的500μg/ml蛋白标准溶液也应-20℃长期保存。
4、将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板或EP管中，加蛋白标准稀释液补足至20μl。
5、加适当体积样品到96孔板或EP管中，补蛋白标准稀释液至20μl。
6、各孔加入200μl G250染色液，室温放置3～5min。
7、酶标仪或分光光度计测定595nm 波长处的吸光度，560~610nm之间的波长也可，根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
注意事项：
1、 G250染色液恢复至室温充分混匀后使用，有利于提高检测的灵敏度，加完G250染色液后，尽量在30min 内完成吸光度的测定，防止沉淀形成后影响实验结果。
2、 蛋白标准在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
3、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
4、 建议每次测定时都做标准曲线，因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定 应每次都做标准曲线。
5、 没有酶标仪，也可使用分光光度计测定，但应考虑比色杯的最小检测体积，需按比例适当加大G250染色液、样品和标准品的用量使总体积不小于最小检测体积，使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
6、 用比色杯测定蛋白含量时，由于考马斯亮蓝易结合石英比色杯，应优先选用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完毕应立即用乙醇清洗干净。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

有效期：12个月有效，蛋白标准配制成溶液后应-20℃冻存。