氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)说明书

产品简介：

氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)，其吸收峰在波长570nm处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比，该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 

自备材料：

1、无氨蒸馏水或去离子水、60%乙醇

2、水浴锅或恒温箱、研钵或匀浆器

3、离心机、离心管或试管

4、比色杯、分光光度计

操作步骤(仅供参考)：

1、配制 AA Lysis buffer (1×)：取 1 份 AA Lysis buffer (5×)加 4 份去离子水混匀即成。

1、准备样品：

①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取 0.4g，按植物组织：AA Lysis buffer(1×)=0.4g：2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)匀浆或研磨，用无氨蒸馏水稀释至40ml，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer(1×)进行匀浆，1000g离心5min，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存，用于氨基酸检测。

④高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer(1×)进行恰当的稀释。

2、配制茚三酮显色液:取0.3g茚三酮，溶解于50ml茚三酮稀释液，搅拌至溶解，即为茚三酮显色液。4℃避光保存，30天有效。注意：茚三酮显色液30天用不完，应丢弃，重新配制。可称取一定量的茚三酮再加稀释液使终浓度为0.6%即可。

3、配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AA Assay buffer，按茚三酮显色液：    AA Assay buffer=35：3的比例混合，即为茚三酮工作液，4℃避光密闭保存，2周有效。注意：AAAssay buffer所含物质浓度较高，且有刺激性，如有结晶或沉淀，应于40~70℃密闭温育，使其溶解后使用。

4、配制维生素C工作液: 取出1支维生素C，准确溶解于30ml无氨蒸馏水，混匀，4℃预冷备用，-20℃保存1周有效。该试剂盒提供的维生素C及其配制的工作液为过量。

注意事项：

1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即测定，应存于4℃。

2、实验中用水尽量保证不被氨污染，否则会强烈干扰反应。

3、如果样品中含有大量蛋白质或多肽也会影响结果的准确性，应先用蛋白沉淀剂去除而后检测，一般常用乙酸、磺基水杨酸、三等作为沉淀剂。AA Lysis buffer有蛋白沉淀剂的功能。

4、氨基酸与茚三酮显色反应可用沸水浴15min，但易退色；在80℃水浴中孵育，并适当延长反应时间，可增强显色效果。产生的蓝紫色产物在1h内保持稳定，建议尽快检测。

5、脯氨酸或羟脯氨酸的检测，建议使用脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)。

6、AA Lysis buffer(5×)和AA Assay buffer有腐蚀性和挥发性，应小心操作，同时应密闭保存，防止挥发。

7、空气中的氧有可能干扰显色反应，尽量隔绝空气。

8、加入维生素C可提高反应的灵敏度，并使颜色稳定，但加入过量，将导致吸光度人为偏大，应严格掌握加入的量。

9、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。

10、所测样品的浓度过高时，应用AA Lysis buffer稀释样品后重新测定。

有效期：6个月有效。4℃运输，氨基酸标准收货后应-20℃保存。