PEG1450溶液(50%,无菌)说明书

简介：

PEG1450溶液(50%,无菌)主要由 PEG1450(CAS号25322-68-3)、磷酸盐等组成，其作用原理使能够改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，两细胞接口处在双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用下，细胞发生融合。PEG1450溶液(50%,无菌)可用作融合剂，以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交，该试剂同Sigma P7181产品，经严格无菌处理。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、MEM 培养基、胎牛血清

2、CO2 培养箱、离心机

3、HAT、HT、A Media Supplement

4、胰蛋白酶消化液

操作步骤(仅供参考)：
1、如果变成胶冻状，可 37~60℃水浴使其变成溶液。 

2、单层贴壁细胞：将杂交前体细胞以相同数量(5×104/ml)接种，以适当的培养基培养细胞，待细胞贴壁扩展至汇合成片(80%汇合率)的密度，吸干培养液，加入2ml PEG1450溶液(50%,无菌)，轻轻转动1min 使PEG1450溶液覆盖所有细胞，静置1min，加入5mlMEM培养液以稀释 PEG1450溶液，吸干净稀释的 PEG1450溶液，再用 5ml MEM 培养液洗涤被 PEG 处理的细胞，吸干净洗液，加入5ml MEM 培养液，37℃，5%CO2 培养过夜；24~48h后先吸去培养液，加入胰酶消化液处理细胞，待细胞消化后吸除胰酶消化液，用 HAT 选择培养剔除 HPRT和TK缺陷细胞；弃上清液，用补加1×HT 和 1×A的培养液重新悬浮细胞，融合12~24h 后进行异核体分析，杂交前体细胞在4~5天内发生死亡，对于大多数融合前体细胞而言，10~14天可见杂交细胞克隆。
3、悬浮细胞：将两种不同亲体的细胞各1ml(约为 1×107)混匀，800g 离心10min 以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之剩余约1ml，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮，在离心管中加入1ml PEG1450 溶液(50%,无菌)，置于37℃水浴 2min，加入5ml提前 37℃预热的含10%胎牛血清的 MEM 培养液，使 PEG1450稀释并停止作用，1000g 离心 5min，弃上清液，加入5mlMEM 培养液以稀释 PEG1450溶液，吸干净稀释的 PEG1450 溶液。用 5ml无血清 MEM 培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min， 弃上清液，重复 1 次该步骤，加入含有20%的胎牛血清的 HAT 选择培养基，混匀，将细胞悬液用培养液稀释至5×104/ml，接种于96孔板（每孔 0.1ml）或其他器皿中，37℃ 5%CO2 孵育过夜24~48h 后选出融合细胞。

注意事项：

1、应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、PEG1450溶液较为粘稠时，可37~60℃水浴使其变成溶液。

3、体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。

 有效期：6 个月有效。