植物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)产品介绍

产品简介：
   
    动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress) 时，会发生脂质氧化。丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解 为一系列包括MDA在内的复杂化合物，此时通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。 

产品组成：

自备材料：

1、植物根茎、叶子等

2、剪刀、离心管、小试管或96孔板、分光光度计或酶标仪、水浴锅或恒温箱、离心机

操作步骤(仅供参考)：

1、样本处理：

①制备MDA提取液：取适量的植物根、茎、叶子、种子等，称量后剪碎，按每0.4g植物样品加入4ml的比例加入组织匀浆液，充分匀浆(一般取0.4～1g植物样品即可)。

4000g 离心10min，取上清液待用，该上清液即为 MDA 提取液；如果采用酶标仪检测结果，应相应减少制备提取液的量，譬如取0.2g植物样品加入2ml组织匀浆液。

②样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量植物样品的MDA含量；测定蛋白浓度非必须步骤，亦可采用经验公式计算。

③该试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表：

2、配制TBA工作液：称取适量TBA，用组织匀浆液配制成浓度为0.68％的TBA工作液， 例如取0.068g TBA 用10ml组织匀浆液配制，最终浓度即为0.68%的TBA工作液。TBA工作液需溶解后再使用，可以加热到60℃促溶，并可通过反复剧烈Vortex促溶；配制好的TBA工作液 4℃避光保存，至少1个月内有效。

3、稀释标准品：如果进行简易快速检测，标准品直接稀释至10μM；如果进行精确检测， 取适量标准品用组织匀浆液稀释至1、2、5、10、20、50μM；如果采用经验公式计算含量，无需标准品；配制好的MDA标准品4℃避光保存，至少3个月内有效。

计算：

如果进行简易快速检测，直接以10μM标准品进行计算，获得MDA的摩尔浓度；如果采用经验公式，无需制作标准曲线或测定标准品；如果需要精确计算，以MDA标准品浓度为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据标准曲线计算处MDA提取液的浓度；对于固体状组织，可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示最初样品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg组织。

简易快速MDA含量计算公式：

MDA 含量(μmol/mg)=(A测定-A空白)/(A标准-A空白)×标准品浓度/蛋白质质量浓度(mg/ml)

式中：A测定=待测样品的 532nm 处吸光度

A标准=标准品的  532nm  处吸光度

A空白=空白对照的 532nm 处吸光度

标准品浓度=10μM

蛋白质质量浓度(mg/ml)=BCA 法测定的蛋白浓度(mg/ml)

不采用标准品的经验公式：

MDA 浓度(μmol/L)=6.45×(A532-A600)-0.56×A450

MDA 含量(μmol/mg)=MDA浓度(μmol/L)×MDA提取液体积(ml)/植物组织鲜重(g)

式中：A532=待测样品的532nm 处吸光度

A600=待测样品的600nm 处吸光度

A450=待测样品的450nm 处吸光度

注意事项：

1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2、 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，检测样品量会相应增加。

3、 待测样品尽量新鲜，提取后应尽快检测，以免活性下降。

4、 待测 MDA提取液如不能及时测定，应置于-20℃保存，4天内稳定。

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

有效期：12个月有效。低温运输，按要求保存。