技术文章
Technical articles
更新时间：2025-12-17
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主要用途
细胞/组织过氧化物体（peroxisome）粗提分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的过氧化物体细胞器的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的过氧化物体的制备。其制备物产量高，可以被用于脂质β-氧化、氨基酸代谢、糖脂和胆汁酸生物合成、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品。
保存方式
保存净化液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
用户自备
HANK平衡盐缓冲溶液（GMS12028）或PBS缓冲溶液（GMS12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离
细胞培养液（GMS12052）：用于细胞处理所需的培养基
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
4℃台式离心机：用于样品操作
4℃超速离心机：用于样品操作
DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞
实验步骤
一、 动物软组织过氧化物体分离（组织匀浆法）
实验开始前，将－20℃冰箱里的净化液（Reagent C）取出冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量（实验前使动物空腹12至24小时）
2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入xx毫升预冷的裂解工作液
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项8）
10． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
11． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1000g
12． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
13． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3500g
14． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
15． 放进4℃超速离心机离心20分钟，速度为25000g
16． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得过氧化物体沉淀物
17． （选择步骤）加入xx毫升预冷的保存液（Reagent E）
18． （选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心10分钟，速度为25000g
19． （选择步骤）小心抽去上清液
20． 加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混匀
21． 即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里
二、动物软组织过氧化物体分离（化学处理法）
实验开始前，将－20℃冰箱里的净化液（Reagent C）取出冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。
1． 手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量（实验前好使动物空腹12至24小时）
2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入一个液氮冻存管
5． 即刻放入液氮罐过夜
6． 次日从液氮罐里取出，即刻（快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）
7． 放进一个15毫升锥形离心管
8． 加入xx毫升预冷的裂解工作液
9． 涡旋震荡5秒，充分混匀
10． 在冰槽里孵育2分钟，期间涡旋震荡5秒一次
11． 加入xx微升预冷的强化液（Reagent D）
12． 涡旋震荡5秒，充分混匀
13． 在冰槽里孵育5分钟，期间涡旋震荡5秒二次（注意：参见注意事项9）
14． 加入xx毫升预冷的保存液（Reagent E），轻轻摇动试管混匀
15． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g
16． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
17． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3500g
18． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
19． 放进4℃超速离心机离心20分钟，速度为25000g
20． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得过氧化物体沉淀物
21． （选择步骤）加入xx毫升预冷的保存液（Reagent E）
22． （选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心10分钟，速度为25000g
23． （选择步骤）小心抽去上清液
24． 加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混匀
25． 即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里
注意事项
1． 本产品为10次（1克动物组织或5 X 107细胞）或50次（200毫克动物组织或1 X 107细胞）操作
2． 实际操作的动物组织重量或细胞量与试剂使用量按比例调整：例如200毫克动物组织：试剂用量是标准用量的五分之一
3． 所有操作均须严格在4℃或以下状态进行
4． 操作时，须戴手套
5． 操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）
6． 建议使用足够的样品量
7． 建议严格控制操作时间
8． 通常匀化次数为20至40下（或细胞颗粒群/组织块状消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数
9． 通常孵育5分钟（不宜超过5分钟）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升裂解物的细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数
10． 可见离心后出现的液面顶端的白色脂肪漂浮层，使用吸管或枪头小心吸掉
11． 对于难以裂解的细胞，例如HeLa细胞，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理
12． 通常1克动物组织或5 X 107细胞的过氧化物体含量为1毫克以上过氧化物体蛋白
13． 如果需要获得99％以上纯度的过氧化物体，使用细胞/组织高质纯化过氧化物体分离试剂盒－GMS10119.3
14． 过氧化物体正常活性测定方法是： CTALASE、HYDROXYPYRUVATE REDUCTASE等
15． 本公司提供系列过氧化物体分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定分离的过氧化物体内外膜完整
3． 本产品经鉴定分离的过氧化物体维持正常活性
4． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
当前位置：
