二氢黄酮醇还原酶（DFR）试剂盒说明书

更新时间：2025-12-31

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注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义

二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

测定原理

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在

500nm 处有特征吸收峰。

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 12mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 1.5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存，临用前加 2mL 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加入 30mL 浓盐酸溶解待用；用不完的试剂 4℃ 避光保存。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm。

2、操作表

	对照管	测定管
酶液（μL）	40	40
试剂一（μL）	140	120
试剂二（μL）		20
试剂三（μL）	20	20
混匀，30℃反应 30min
乙酸乙酯（μL）	200	200
37℃震荡 10min，取上层溶液，N2 吹干
无水乙醇（μL）	100	100
充分震荡
试剂四(μL)	300	300
混匀，25℃静置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 500nm 处吸光值 A。分别记为A 对照管和A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999

（1）按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在 30℃，pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×Cpr ）÷T ÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr

（2）按照样本质量计算

酶活性定义：在 30℃，pH7.5 条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T ÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷W

V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应体系中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0092x+0.0002，R2=0.999