小鼠视网膜色素上皮细胞产品介绍

一．产品简介

1、产品名称：小鼠视网膜色素上皮细胞       

2、组织来源：眼组织

3、产品规格：25cm²培养瓶/5×10⁵cells

4、细胞简介：

小鼠视网膜色素上皮细胞分离自眼组织；视网膜色素上皮为一层矮六角棱柱状细胞，高8～10μm，宽12～18μm。细胞顶部伸出许多长5～7μm的突起。在胚胎发生时，上皮基部和脉络膜紧密连接，但顶部与视细胞连接不紧，故易在此发生视网膜剥离。电镜观察，细胞之间有紧密连接、中间连接和缝隙连接，基底部有胞膜内褶和线粒体，故推测色素上皮有运输离子和屏障作用。胞核圆形，位于细胞基部。顶部胞质含许多椭圆或圆形的黑色素颗粒和含板层碎片的残余体。滑面内质网发达，分布于色素颗粒和残余体之间。有高尔基复合体、溶酶体、粗面内质网和脂滴。这些结构反映了色素上皮的多种功能：①色素颗粒由粗面内质网产生，经高尔基复合体转运至胞质顶部。已知两栖类和鱼类受强光照射时，色素颗粒移入突起中；处于黑暗时，色素颗粒又回到胞质中，这说明色素上皮有吸收光和保护视细胞免受强光刺激的作用；②脂滴有集聚和贮存维生素A的作用，通过滑面内质网的酯化与转运，参与视细胞合成视紫红质；③能吞噬脱落的视杆细胞外节膜盘，藉溶酶体酶水解消化，形成残余体；④分泌蛋白多糖，粘合和维持视杆、视锥与色素上皮的相互位置关系，从而保证视紫红质的更新和营养物质的传递。

本公司生产的小鼠视网膜色素上皮细胞采用酶液消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells，细胞经CK18免疫荧光鉴定；细胞纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 

5、培养基信息：

培养基内容：基础培养基、FBS、Penicillin、Streptomycin等；

为保证细胞体外培养最佳状态我们推荐使用小鼠视网膜色素上皮细胞专用培养基作为体外培养小鼠视网膜色素上皮细胞专用培养基。

二．细胞发货及鉴定图片

（1）细胞状态照片：细胞发货时发送至少3张细胞发货前白光电子照片；

（2）细胞鉴定照片：提供一套细胞鉴定图片（可用于发文章）；若要用于文章多套使用，需额外增加鉴定费用，提供3套鉴定图片；       

三．使用方法

在技术部标准操作流程下，小鼠视网膜色素上皮细胞可传1-2代左右；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

一、客户收到细胞操作如下

1. 取出25cm²培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态；

2. 观察细胞生长情况，细胞密度低于80%时，贴壁细胞倒去瓶中培养液，留下8ml作用继续培养；细胞密度大于80%时，即可进行传代；

3. 吸出25cm²培养瓶中的培养基，用PBS洗涤3次；

4. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴2-3min左右；倒置显微镜下观察细胞回缩变圆，透亮时即可终止消化，加入双倍充分培养液轻轻吹打细胞使其变成单细胞悬液；

5. 收集细胞悬液至离心管内，1000rpm离心5min，观察细胞沉淀；

6. 加入1ml的充分培养液，轻轻吹打成单细胞悬液，均匀分配至细胞培养瓶中，初次传代建议按照1：2比例进行。

7. 待细胞充分贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的充分培养基。

二、细胞冻存管复苏

1. 提前室温预热培养基，将水浴锅调至37℃；

2. 在超净工作台内提前准备好15ml离心管，并加入5ml的充分培养基；

3. 将冻存管快速放入水浴锅中，不断晃动冻存管，直至管内冰块全部融化

4. 然后快速取出，喷洒酒精，转移至超净工作台；

5. 拧开冻存管螺纹盖，用移液枪将细胞悬液轻轻吸出，转移至含5ml充分培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

6. 离心结束后，观察有无细胞沉淀，将上清弃去，加入1ml新鲜的充分培养基，用移液枪轻轻吹打成细胞悬液；将细胞悬液转移至T25培养瓶中，T25培养瓶建议培养基加入量5-7ml，轻轻晃动培养瓶使细胞分散均匀，置于培养箱中培养。

三、细胞冻存

1. 冻存条件：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO或者无血清冻存液

2. 保存条件：液氮存储

四、注意事项

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月；