苯丙氨酸解氨酶

苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）试剂盒                            分光光度法  50管/48样

注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

PAL（EC4.  3 1  5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的

关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，

在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

测定原理

PAL催化  L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm处有zui大吸收值，

通过测定吸光值升高速率计算 PAL活性。

所需的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1  mL石英比色皿、研钵、冰

和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液：液体 60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体 40mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×3 瓶，4℃保存。临用前每瓶加入 4mL  蒸馏水水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；

试剂三：液体 2.5mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL

提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和对照管吸光值A2，△A=A1-A2。

注意：对照管只要做一管

PAL活性计算

（1）按蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶

活性单位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（Cpr×V样）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每g组织每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。

PAL（U/g鲜重）＝ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V反总：反应体系总体积，1.04mL；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液

体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；