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什么是载体菌株,让我们分别来介绍下
时间:2021-02-24 点击次数:49
   什么是载体菌株呢?载体代表了新型表达载体,它具备所有广受欢迎的克隆载体的理想特点和 T7 驱动蛋白表达的完全功能。目标基因以相对于修饰的大肠杆菌 tet 启动子的反义方向插到 lacZ a - 肽编码区,因此可进行蓝 / 白斑筛选。正确定位于目标基因正义方向上游的 T7 转录和翻译信号使表达成为可能。与标准 pET 载体一样,通过转化 λ DE3 溶原菌并用 IPTG 诱导或通过 l CE6 感染原始宿主菌生产目标蛋白。
  你从载体map上看到的启动子终止子只是启动和终止目的基因表达的控制元件。而事实上质粒复制以及质粒功能的实现(比如说抗性)都需要启动载体基因的表达,也就是说,质粒载体上除了你在看到的启动子,还有若干个质粒结构基因的启动子,只是这些启动子一般不需要人为控制,所以没有体现在载体图谱上。
  在菌株中当存在x-gal时产生白菌落表型,而带有非重组载体的菌落变蓝。由于T7驱动的蛋白表达要求插入片段克隆到相对于tet启动子的反义方向,因此实际上没有目标序列的基础表达。相对于pET载体,pETBlue质粒上高拷贝PUC复制起点增加了质粒产量,为测序、突变和其它质粒操作带来方便。可用于在胞浆中形成许多真核蛋白正确折迭和活性所要求的二硫键。低温诱导也可增加可溶性目标蛋白的比例。
 

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