国内科研工作者对转基因玉米的研究（elisa法）

ELISA在转基因玉米检测中的应用

玉米螟是玉米的主要害虫之一，统计资料表明每年因玉米螟而造成的损失产量在5%左右。20试剂90年代以来，通过转基因技术将苏云金杆菌的Bt毒蛋白基因导入玉米而获得的抗玉米螟杂交种已成为一种有效的防止玉米螟危害的方法。目前，在所有转基因玉米品种中,Bt玉米的终止面积zui大效果，是大规模商业化的主要转基因玉米品种。

中国专家应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白质作为标准蛋白和免疫抗原，通过抗体-抗原-酶标抗体反应，建立了简介酶联免疫吸附测定法，对4中进口转基因玉米实物样品进行了测定。在实验过程中首先通过建立的间接ELISA检测方法对Bt1蛋白的颗粒比标准曲线、Bt1、蛋白质质量浓度标准曲线。根据间接ELISA法检测得到的Bt1蛋白的颗粒比标准曲线与质量您浓度标注曲线以及间接法测定的玉米实物样品结果，可以换算得到样品颗粒比结果与质量弄对结果，并得到了免疫印证分析的验证。同时在实验中，还设立了阴性(NC,颗粒比0%)、阳性（pc、颗粒比0.15%)和空白（BC,提取液）3ge duizhao ,并与双抗体夹心法做了比较，对照以及对比试验结果一致，显示应用该方法检测玉米实物的结果是可靠的。与此同时，此种方法对Bt1蛋白质的质量浓度zui低可捡值为0.312ug/ml和颗粒比zui低可检值为0.15%。该实验中建立的简介ELISA检测方法不仅可以成功检测处转基因玉米种的Bt1蛋白，而且还具有由于试剂盒法的灵敏度，快速简便，见底了检测成本

部分专家采用了ELISA检测法对转基因抗虫玉米品的4个生长发育时期的不同部位的Bt蛋白进行了定量分析。通过对样品玉米在雄前，抽丝，灌浆初期和乳熟末期这四个时期的第10、15、21、页及茎表皮，茎髓，雄穗小花，花粉，雄穗干，花丝，雌穗轴，雌穗柄，籽粒共12个部位的取样，前处理后用进口ELISA试剂盒对标准Bt毒蛋白和样品进行检测，以标准Bt°蛋白浓度为纵坐标，以ELISA法测定的相对应OD450nm值为横坐标，绘制标准曲线1以牛血清白蛋白BSA为标准利用考司马亮蓝G250法绘制OD450nm值岁标准可溶性蛋白BSA含量变化绘制标准曲线2将样品测得OD450nm值带入标准曲线1相对应的线性方程，便可以计算出代测样品的Bt蛋白含量。通过与可溶性蛋白相比较，转基因抗虫玉米Bt毒蛋白站可溶性蛋白的比例，可以看出出花粉外，转基因玉米的其他11个部位Bt毒蛋白含量比例随着作物的生长周期的延伸呈上升趋势。说明随着Bt毒蛋白表达量的提高，玉米的抗虫能力会不短增强。由于ELISA方法易受检测环境的温度和湿度等影响，所以在实验中研究者选择相同的实验环境，并且通过建立标准曲线降低了系统的误差。同时以阴性玉米材料（即不表达Bt毒蛋白）和空白为对照，未检查Bt毒蛋白，也证实了实验结果的可靠性。该实验的Bt毒蛋白zui低检出量为0.5ng/ml

ELISA试剂盒