层析技术

层析技术

    层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相；另一是流动相。当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组分，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。反之，与固定想相互作用越强的组分，向前移动的速度越慢。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。

层析系统的必要组分有：

（1）、固定相。固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂、凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解，交换等作用。它对层析的效果起着关键的作用。可以是一种固体、凝胶或固定化的液体，由某种支持基质所支撑。

（2）、层析床。把固定相填入一个玻璃或金属柱中，或者薄薄涂布一层于玻璃或塑料片上或者吸附在醋酸纤维纸上。

（3）、流动相。在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。它也是层析分离中的重要影响因素之一。

（4）、运送系统。用来促使流动相通过层析床。

（5）、检测系统。用于检测试管中的物质。

层析根据不同的标准可以分为多种类型：

1. 根据固定相基质的形式分类。层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。纸层析是指以滤纸作为基质的层析。柱层析则是指将基质填装在管中形成柱形，在柱中进行层析。纸层析和薄层层析主要适用于小分子物质的快速检测分析和少量分离制备，通常为一次性使用，而柱层析是常用的层析形成。适用于样品分析、分离。生物化学中常用的凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、液相色谱等都通常采用柱层析形式。
2. 根据流动相的形式分类。层析可以分为液相层析和气相层析。气相层析是指流动相为气体的层析，而液相层析指流动相为液体的层析。气相层析测定样品时需要气化，大大限制了其在生化领域的应用，主要用于氨基酸、核酸、糖类、脂肪酸等小分子的分析鉴定；而液相层析是生物领域zui常用的层析形成，适于生物样品的分析、分离。
3. 根据分离的原理不同分类。层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。

    吸附层析：是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离目的的一种层析技术。

    分配层析：是根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术。

   凝胶过滤层析：是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种。

   离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的一种。

   亲和层析：是根据生物大分子和配体之间的特异性亲和力（如酶和仰制剂、抗体和抗原、激素和受体等），将某种配体链接在载体上作为固定相，而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种。亲和层析是分离生物大分子zui为有效的，具有很高分辨率。