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科研用小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)
简介:
产品编号:SJH-033275
产品名称:科研用小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)elisa试剂盒
英文名称:Mouse Calf intestinal alkaline phosphatase,CIAP ELISAKit
检测样本:血清、血浆细胞上清液、灌洗液。
检测方法:双抗夹心法
样本体积:50-100ul
规 格:48T/96T
产 地:中国·青岛
产 地:国产/进口
保存条件:2-8℃下,可放置6个月。
产品用途:仅用于科研实验,严禁用于临床诊断
保存条件:2-8℃环境中遮光保存。
其他品牌:
试剂类:SIGMA、AMERSCO、TCI、TRC、美国中草药
血 清:GIBCO、HYCLONE、四季青、MRC
抗 体:ABCAM、SANTA、CST、BD、华美、RD
在售的科研用小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)elisa试剂盒的产品优势:
1、本品采用天然抗体包被而成,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点。
2、部分指标产品采用进口原装抗体包被,质量放心可靠。
3、可提供免费打代测服务,山东省内可上门取样。
4、一次购买十盒或一个月累计购买十盒可享受经销商提货价。
5、可为 自测可户提供全程。
操作举例:
科研用小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)elisa试剂盒ELISA的种类很多,不同ELISA的具体操作过程不*相同,但是基本过程是*的。下面以简洁竞争ELISA测定黄曲霉毒素B1为例,对ELISA的具体操作过程叙述如下。
抗原包被(antigen coating)将AFB1与牛许晴白蛋白(BSA)的练街舞AFB1-BSA(也可以是卵清蛋白的练街舞AFB1-OV)溶解于0.1mol/L pH9.5的碳酸盐缓冲液中奖溶液加入酶标板的微孔内,通常每孔加200ul,4℃放置过页,去除恢复至室温,倾去微孔内溶液(包被液),已含有0.05%的TWEEN-20的PH7.0、0.05mol/L磷酸缓冲溶液生理盐水(PBST)满孔洗涤3次,每次5min,控干,即得到包被有AFB1-BSA的酶标板。在这个过程中AFB1-BSA通过物理吸附包被(粘附)在酶标板微孔的内壁上,没有包被的抗原被洗涤去除。
包被抗原的浓度对ELISA的测定结果由较大的影响,浓度过高或过低都会影响测定结果,如下图是不同包被浓度时,竞争ELISA的抑制曲线。在图中可以看出,包被浓度对灵敏度的影响较大,当包被浓度为5ug/ml时,灵敏度(zui小检出量)达1.57ng/ml,其他浓度的灵敏度都比该浓度的差,这说明5ug/ml是叫合适的包被浓度
从宏观上看,包被浓度无论是过高还是过低都表现为灵敏度差,但是从微观上分析,他们的情况是不同的,低包被浓度时,包被抗原的量不足,微孔内吸附的抗原量少,可供抗体结合的抗原决定簇少,从而影响灵敏度高;二高浓度时包被抗原的量过多,微孔内吸附的抗原包被抗原进一步和抗体结合,降低了灵敏度,因此只有合适的包被抗原浓度,才能得到的灵敏度。这种关系见下图
科研用小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)elisa试剂盒的封阻 所谓封阻是指酶标板被抗原包被后,在微孔中加入一定浓度BSA、OV、明胶或脱脂牛奶等溶液以封阻微孔内没有被抗原包被的空袭,避免抗体非特异性吸附于这些空袭,以提高实验结果的准确性和可靠性,常用的封阻剂包括BSA、OV、明胶和脱脂奶等,其中以脱脂牛奶较为便宜,而且封阻效果和其他几种封阻剂没有明显的差别。
抗原抗体竞争反应 在酶标板的每个微孔中加入一定量的适当稀释度的抗体(抗血清),同时分别加入一定量的准溶液用于做标准曲线,混匀,37℃保温1-2H,包被在酶标板上的固定抗原(AFB1-BSA)和添加的AFB1标准品或样品抽提液中的AFB1游离抗原竞争抗体的结合位点,PBST洗涤扣干3次,游离的抗原抗体符合无被洗涤去除。
酶标二抗与抗原抗体复合物的反应 将一定量的适当稀释的酶标二抗溶液加入个反应孔,37℃保温1-2h,酶标二抗和抗原抗体符合无反应,形成抗原-抗体-酶标二抗的复合物固定在酶标板上,PBST洗涤扣干5次,将有力多余的酶标二抗去除。
底物显色反应和吸光值的测定 每孔加反应底物100ul(40mg临本二胺溶于100ml、PH5.0/0.2mol/L柠檬酸0.1mol/l磷酸氢钠缓冲溶液,加入150ul H2O2,现配现用,37℃保温保湿,避光反应30min,每孔加50ul 2mol/L,H2SO4终止反应,5min后,以酶联免疫测定仪于490nm测吸光度。
科研用小鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)elisa试剂盒Elisa竞争抑制曲线 以AFB1标准误溶液中的AFB1的浓度对数为横坐标,以不同AFB1浓度所对应的吸光值和AFB1浓度为零时吸光值的比值的百分数(称为竞争抑制率)为纵坐标,绘制ELISA竞争抑制曲线,根据样品抽提液的吸光值,利用竞争抑制曲线,计算出样品中AFB1的含量,上述ELISA的操作过程
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