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GUS 染色液(即用型)
时间:2020-11-24 点击次数:265

产品简介:

GUS(β-Galactosidase)基因是存在于 E.coli 等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸

酶的一种水解酶,该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。GUS 受体基

因系统有表达 E.coli GUS 酶的稳定性和在植物内的低活性,绝大多数植物没有检测到葡萄

糖苷酸酶的背景活性,以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物,其反应产物可用多种方法检测出来。

5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide,cyclohexylammonium salt(简称为

X-Gluc  X-GlcA)分子量为 521.8,CAS 号为 18656-96-7,是检测大肠杆菌中 GUS 基因

的底物,可快速检测植物中 GUS 基因融合标记。

GUS 染色液(即用型)又称β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase

Reporter Gene Staining Kit)简称为 GUS 染色液,其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄

糖苷酶(GUS)可将 X-Gluc 水解成蓝色物质,该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝

物质,具有 GUS 活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点,可用肉眼或显微镜观察到,GUS

染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色,多用于转基因

植物的 GUS 基因表达分析,该即用型试剂比常规 GUS 染色液操作简便。该试剂仅用于科

研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

  

名称                                           50ml            100ml

试剂(A): X-Gluc                         1              2  

试剂(B): X-Gluc Solution          1ml             2×1ml 

试剂(C): GUS Buffer                   50ml          100ml 

使用说明书                             1 

自备材料:

1、 70%乙醇

2、 去离子水

3、小瓶或多孔板、显微镜

 

GUS 染色液(即用型)操作步骤(仅供参考)

1、配制 X-Gluc 溶液(50x):取 1ml X-Gluc Solution 完全加至 1  X-Gluc 中,充分溶解,

即获得 X-Gluc 溶液(50x)。配制好的 X-Gluc 溶液(50x)-20℃保存,1 个月有效。

2、配制 X-Gluc 染色液:取适量的 X-Gluc 溶液(50x)和 GUS Buffer,按 1:49 比例充分

混匀,配制成 X-Gluc 染色液,如取 0.2ml X-Gluc 溶液(50x)加入到 9.8ml GUS Buffer 中,

即配成 10ml GUS 染色液,该染色液现用现配,短期贮存可以 4℃保存 3 天。

3、取适量待染叶片等组织加入适量 GUS 染色液使其完全浸没组织。

4、37℃孵育 1~24h,随着孵育时间的延长,蓝色渐渐出现,当表达量较高时 GUS 活性的

部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。

5、用 70%乙醇脱去样本的叶绿素,一般样本浸没于乙醇 1~3h,至阴性对照呈白色。如有

必要可重复该脱色步骤,以便彻底清除叶绿素;样本保存于乙醇中,可用肉眼或普通光学显

微镜下观察,白色背景上的蓝色即为 GUS 表达位点。

注意事项

1、 GUS 染色液冰上配制,可以 4℃避光保存 3 天。

2、 由于组织特异性等原因,蓝色颜色反应可能不完全一致,应注意摸索具体实验条件。

3、 拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗根就可直接染色;烟草和马铃薯这些植物的茎和叶

须在染色前切成薄片(1~3mm)。

4、 当操作大的组织和样品时可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞,建议采购常规

GUS 染色液(DP0011)。

5、 GUS 染色液(即用型)染色灵敏度较好,但有时会出现非特异性反应(即假阳性),如非特

异性反应较明显,建议采购常规 GUS 染色液(DP0011)。

GUS 染色液(即用型)有效期: 6 个月有效。

 

 

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