吉姆萨染色液（Giemsa stain,1:9,染色体专用）说明书

产品简介：

Giemsa Stain以进口的姬姆萨色素、甲醇为主要原料，含*衬染剂，经研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果，经常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色。吉姆萨色素(又称姬姆萨色素)是由天青Ⅱ与伊红混合而成，Giemsa染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳，故姬姆萨染液常与瑞氏染 液联合使用。

许多染料对DNA都有不同程度的亲和性，故都可用作染色体的染色。在染色体的常规染色中，一般用吉姆萨、地衣红、福尔根、石碳酸复红等都可获得良好的染色效果。G显带技术是指将染色体玻片标本经过胰蛋白酶处理后，再用吉姆萨进行染色，使每条染色体沿其长轴显示出一定数量的、宽窄和深浅不同的横纹，即带型。由于人类22 种常染色体和X、Y 染色体的带型各具特征，根据带型可清楚地分辨出每条染色液。GiemsaStain(1:9，染色体专用)由10×储存液和磷酸盐缓冲液组成，1:9 混合后使用，主要用于染色体G带染色。 

自备材料：

1.PHA、秋水仙素

2.0.075M 溶液

3.恒温培养箱

4.甲醇乙酸固定液(甲醇：冰乙酸=3：1)

5.载玻片、显微镜

操作步骤(仅供参考)：

1、配制 Giemsa Stain 工作液：按试剂(A):试剂(B)=1:9 混合，即取1份 Giemsa Stain 储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中充分混匀，即为GiemsaStain工作液，该工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。如效果不佳，可改变配制比例。

2、培养：取人类外周血3~5ml在PHA(一般工作浓度约60ug/ml)、血清等条件下体外培养3天，加入BrdU和(或)秋水仙素(一般工作浓度约0.5ug/ml)，培养30~60min并收集细胞即2000g离心5min，留取沉淀。

3、低渗：加入5~8ml提前37℃预热的0.075M溶液37℃低渗处理20~30min。

4、固定：加入1ml新配制的甲醇乙酸固定液，轻轻混匀，2000g离心5min，留取沉淀；再次加入2~3ml甲醇乙酸固定液，轻轻混匀，室温固定15~20min，2000g离心5min，留取沉淀；再次加入2~3ml 甲醇乙酸固定液，重复该步骤，留取沉淀。

5、滴片：加入少许甲醇乙酸固定液至沉淀中，轻轻混匀制成细胞悬液。滴加2~3滴细胞悬液于提前遇冷的载玻片上，吹散水蒸气熏蒸促使细胞破裂(亦可高空垂直滴下细胞悬液促使细胞破裂)，70℃烤片2h。

6、消化：用0.025~0.05%的胰蛋白酶溶液处理载玻片30~90min，依据胰蛋白酶的浓度、批次等摸索处理时间。

7、染色：滴加Giemsa Stain工作液覆盖玻片，室温染色15～30min。

8、用自来水或蒸馏水缓慢从载玻片一端冲洗，将多余染色液冲掉。空气干燥。

9、先用低倍镜浏览整张玻片标本，找到分散良好且染色体长短适中的分裂相，再用油镜观察并识别染色体G显带核型。

注意事项：

1、涂片染色中Giemsa染色后，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。

2、如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液浓度。

3、pH 值对染色有一定影响，载玻片应清洁、无酸碱污染，以免影响染色效果。

4、染色液经稀释后液面有金属光泽则表示染液有染色作用，否则染色液可能失效。

5、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。 

有效期：24个月有效。