产品简介

核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，根据化学组成不同，核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)，核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量为9.2%，RNA中磷含量为9.0%

核酸检测试剂盒(定磷比色法)检测原理是在强酸条件下，核酸分子中的有机磷转化为无机磷，后者与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵，随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子，进而形成蓝色的钼蓝，在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比，通过分光光度计在660nm 处检测吸光度，通过检查标准曲线，获得磷含量，如果待测样品中有无机磷，应予以扣除，否则结果偏高。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、蒸馏水、浓硫酸

2、离心管或试管

3、容量瓶

4、凯氏烧瓶

5、水浴锅

6、比色杯、分光光度计

操作步骤(仅供参考)：

1、稀释标准品：取适量的磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：蒸馏水=1：49 的比例

稀释标准品至 20μg/ml。取干净离心管或试管，按下表进行标准品浓度的依次稀释，获得不同浓度的多个磷标准。

 2、制备待测样液：取样品(如核酸粗提物)0.05g，加入少量蒸馏水溶解（如果难以溶解，可滴加样品处理液至溶液 pH=7.0），准确定容至 25ml(此溶液样品含量 2mg/ml)，即为待测样液。

3、制备总磷测定液：取上述待测样液(2mg/ml)1ml，置于 50ml 凯氏烧瓶，加入 1ml 浓硫酸和 1 粒玻璃珠，凯氏烧瓶内插入一个小漏斗，放在通风橱内加热至溶液呈黄色时取出，稍冷却后加入 2～3 滴 H₂O₂，继续消化至透明，表示消化完成。冷却，转移消化液至 100ml 容量瓶中，用少量蒸馏水洗涤凯氏烧瓶 2 次，洗涤液一并倒入容量瓶，加蒸馏水定容至 100ml，混匀后待用，即为总磷测定液。

4、无机磷测定液(选做)：取上述待测样液(2mg/ml)1ml，置于 100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容至 100ml，混匀后待用，即为无机磷测定液。

5、磷加样：按下表进行操作，依次加入下列溶液，如果样品中有无机磷，应同时检测无机    磷，并将无机磷扣除。

 6、磷测定：45℃孵育 10min，冷却后以分光光度计测定 660nm 处标准管、无机磷测定管、总磷测定管的吸光度(分别记为A_标准、A_无机磷、A_总磷)。

计算： 以磷含量(μg)(0~8 号)为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得标准曲线。以 A_有机磷=A 总磷－A_无机磷之差值，在标准曲线查的有机磷的质量(μg)，再根据测定时取样 ml 数，求得有机磷的质量浓度(μg/ml)。

按下列公式计算样品中核酸的质量分数：

核酸质量分数(%)=CV×11/m×100%

式中：C=有机磷的质量浓度(μg/ml)

 V=样品的总体积(ml)

11=1μg 磷相当于 11μg 核酸

 m=样品质量(μg)

注意事项：

1、 待测样品如不能及时测定，应置于 2~8℃保存，3 天内稳定。

2、 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

3、 消化时间应视样品不同而不同，如果是 RNA 样品，一般在 800W 电炉上消化 45min。

有效期： 6 个月有效。常温运输，4℃保存。