血浆中水杨酸的HPLC测定法

血浆中水杨酸的HPLC测定法

一、目的要求

1、掌握血液样品前处理方法

2、掌握回收率测定方法和计算方法、

二、主要仪器和药品。

 液相色谱仪,ODS分析柱，水杨酸标准品，空白血浆，标准血样。

三、实验方法

水杨酸（Salicylic Acid)

色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（150mm x 4.6mm,5um)流动相：甲醇-磷酸二氢钾（10mmol/L，ph3.0）（5:5）：流速1ml/min：检测波长230nm：进样体积20uL.理论板数以水杨酸峰计不低于2000.

血浆中水杨酸回收率测定：取水杨酸标准品适量，加甲醇溶解并稀释成0.5mg/mL的对照品溶液，取适量用流动相稀释成20ug/ml的标准品的稀释液。另取空白血浆0.4ml，加入25ul水杨酸对照品溶液，漩涡混匀，加入0.2ml6%高氯酸沉淀蛋白，10000r/min离心10min，取上清液作为样品测定液。同法制备血浆空白液，取对照品稀溶液，样品测定液和需将空白页各20ul、进行，记录色谱图。

回收率计算：根据对照品稀溶液浓度，峰面积和样品测定液峰面积，水杨酸加入量，计算回收率。对照品稀溶液浓度C对=20ug/ml，样品测定液中加入的水杨酸浓度Cm=（0.023 x 500）/（0.4+0.2+0.025）=20ug/ml，所以血浆中水杨酸回收=A样/A对 x 100%

四、注意事项

1、标准品溶液与样品液必须分别重复进行三次，取平均峰面积进行计算。

2、外标法测定含量，样品处理中应严格定量操作。

3、为获得高的精密度，惊醒量必须大于定量环容积的2-3倍

标准品