动物性食品中的氯霉素残留测定

动物性食品中的氯霉素残留测定

    酶标板的唯恐包被有偶联抗原，当加入标准品货待测样品。再加入氯霉素抗体时，包被抗原与加入的标准品货待测样品竞争抗体，加入酶标记物，酶标记物与抗体结合。通过洗涤除去游离的抗原、抗体及抗原-抗体复合物。加入底物液，底物被结合到酶标板上的酶标记物催化而显色，在45nm处测量吸光度值，与标准曲线与定量。在整个反应过程中，样品中氯霉素含量越高，反应显色就越浓，即氯霉素含量与吸光度值成反比。

仪器与试剂

仪器：

酶标仪；旋转蒸发仪；组织匀浆器；冷冻离心机；振荡器；氮吹仪。

试剂：所用试剂均为分析纯；水位符合国标规定的二级水

乙酸乙酯、正乙烷、氯霉素ELISA试剂盒 2-8℃冰箱中保存。

实验步骤：

样品的提取；将虾肉匀浆，4℃冷藏备用。；称取制备好的对虾样品（3±0.03）g，置50ml离心管中，加入乙酸乙酯6ml振荡10min，室温3800r/min。吸取上层液4ml（约相当于2g样本），50℃下氮气吹干，加入正乙烷1ml溶解残留物，再加缓冲液工作液1ml强烈振荡1min，再次离心15min，取50ul用于分析。稀释倍数为0.5倍。做空白对照。

试剂准备工作：从4℃冷藏环境中去除所需试剂，置室温（20-25℃）平衡30min以上，每种液体试剂使用前均摇匀，。

洗涤液工作也 将浓缩洗涤液（20倍浓缩）40ml用水稀释至800ml备用。

缓冲液工作液 将浓缩缓冲液（2倍浓缩）50ml用水稀释至100ml备用。

氯霉素抗体工作液 用缓冲液工作液按1:10的比例稀释氯霉素抗体浓缩液（如400ul浓缩液+4ml的缓冲液工作液，足够4个唯恐板条32孔用）

测定： 

将铝箔袋沿着外延剪开，去除需要数量的微孔板及框架，平衡至室温。将样品和标准品对应为空按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和杨平孔所在的位置

加入标准品或处理好的试样50ul到各自的为空中，然后加入氯霉素抗体工作液50ul，盖板，轻轻振荡混匀，室温环境中反应1h。取出酶标板，将孔内液体甩干，于每孔中加入洗涤液工作液250ul，洗涤4-5次，用洗水纸排干。

每孔中计入酶标记物100ul，盖板，室温环境中反应30min。取出酶标板，将孔内液体甩干，每个为空中加入洗涤液工作液250ul，洗涤4-5次，用西都会纸拍干。

加入底物液A液50ul和底物液B液50ul到微孔中，轻轻振荡混匀，室温环境中避光显色30min

加入终止液50ul到为空中，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔吸光度值。

结果计算

定性测定 示例：以0.45ug/l标准液的吸光度值为判断标准，样品吸光度值大于或等于该值为检出，小于该值为可疑，建议用确定法确证。

定量测定  按一下公式计算吸光度值

相对吸光度值=B/B0*100%