小鼠泛素蛋白（Ub）elisa试剂盒*

简介：

产品编号：SJH-033266

产品名称：小鼠泛素蛋白(Ub)elisa试剂盒*

英文名称：Mouse Ubiquitin,Ub ELISA Kit

检测样本：血清、血浆细胞上清液、灌洗液。

检测方法：双抗夹心法

样本体积：50-100ul

规    格：48T/96T

产    地：中国·青岛

产    地：国产/进口

保存条件：2-8℃下,可放置6个月。

产品用途：仅用于科研实验，严禁用于临床诊断

保存条件：2-8℃环境中遮光保存。

其他品牌：

试剂类：SIGMA、AMERSCO、TCI、TRC、美国中草药

血 清：GIBCO、HYCLONE、四季青、MRC

抗 体：ABCAM、SANTA、CST、BD、华美、RD

在售的小鼠泛素蛋白(Ub)elisa试剂盒*的产品优势:

1、本品采用天然抗体包被而成，具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点。

2、部分指标产品采用进口原装抗体包被，质量放心可靠。

3、可提供免费打代测服务，山东省内可上门取样。

4、一次购买十盒或一个月累计购买十盒可享受经销商提货价。

5、可为 自测可户提供全程。

操作举例：

小鼠泛素蛋白(Ub)elisa试剂盒*ELISA的种类很多，不同ELISA的具体操作过程不*相同，但是基本过程是*的。下面以简洁竞争ELISA测定黄曲霉毒素B1为例，对ELISA的具体操作过程叙述如下。

    抗原包被（antigen coating)将AFB1与牛许晴白蛋白（BSA)的练街舞AFB1-BSA（也可以是卵清蛋白的练街舞AFB1-OV)溶解于0.1mol/L pH9.5的碳酸盐缓冲液中奖溶液加入酶标板的微孔内，通常每孔加200ul，4℃放置过页，去除恢复至室温，倾去微孔内溶液（包被液），已含有0.05%的TWEEN-20的PH7.0、0.05mol/L磷酸缓冲溶液生理盐水(PBST)满孔洗涤3次，每次5min，控干，即得到包被有AFB1-BSA的酶标板。在这个过程中AFB1-BSA通过物理吸附包被（粘附）在酶标板微孔的内壁上，没有包被的抗原被洗涤去除。

    包被抗原的浓度对ELISA的测定结果由较大的影响，浓度过高或过低都会影响测定结果，如下图是不同包被浓度时，竞争ELISA的抑制曲线。在图中可以看出，包被浓度对灵敏度的影响较大，当包被浓度为5ug/ml时，灵敏度（zui小检出量）达1.57ng/ml,其他浓度的灵敏度都比该浓度的差，这说明5ug/ml是叫合适的包被浓度

从宏观上看，包被浓度无论是过高还是过低都表现为灵敏度差，但是从微观上分析，他们的情况是不同的，低包被浓度时，包被抗原的量不足，微孔内吸附的抗原量少，可供抗体结合的抗原决定簇少，从而影响灵敏度高；二高浓度时包被抗原的量过多，微孔内吸附的抗原包被抗原进一步和抗体结合，降低了灵敏度，因此只有合适的包被抗原浓度，才能得到的灵敏度。这种关系见下图

    封阻 所谓封阻是指酶标板被抗原包被后，在微孔中加入一定浓度BSA、OV、明胶或脱脂牛奶等溶液以封阻微孔内没有被抗原包被的空袭，避免抗体非特异性吸附于这些空袭，以提高实验结果的准确性和可靠性，常用的封阻剂包括BSA、OV、明胶和脱脂奶等，其中以脱脂牛奶较为便宜，而且封阻效果和其他几种封阻剂没有明显的差别。

    抗原抗体竞争反应 在酶标板的每个微孔中加入一定量的适当稀释度的抗体（抗血清），同时分别加入一定量的准溶液用于做标准曲线，混匀，37℃保温1-2H，包被在酶标板上的固定抗原（AFB1-BSA)和添加的AFB1标准品或样品抽提液中的AFB1游离抗原竞争抗体的结合位点，PBST洗涤扣干3次，游离的抗原抗体符合无被洗涤去除。

    酶标二抗与抗原抗体复合物的反应 将一定量的适当稀释的酶标二抗溶液加入个反应孔，37℃保温1-2h，酶标二抗和抗原抗体符合无反应，形成抗原-抗体-酶标二抗的复合物固定在酶标板上，PBST洗涤扣干5次，将有力多余的酶标二抗去除。

    底物显色反应和吸光值的测定 每孔加反应底物100ul（40mg临本二胺溶于100ml、PH5.0/0.2mol/L柠檬酸0.1mol/l磷酸氢钠缓冲溶液，加入150ul H2O2,现配现用，37℃保温保湿，避光反应30min，每孔加50ul 2mol/L,H2SO4终止反应，5min后，以酶联免疫测定仪于490nm测吸光度。

    小鼠泛素蛋白(Ub)elisa试剂盒*Elisa竞争抑制曲线 以AFB1标准误溶液中的AFB1的浓度对数为横坐标，以不同AFB1浓度所对应的吸光值和AFB1浓度为零时吸光值的比值的百分数（称为竞争抑制率）为纵坐标，绘制ELISA竞争抑制曲线，根据样品抽提液的吸光值，利用竞争抑制曲线，计算出样品中AFB1的含量，上述ELISA的操作过程

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