乙酰辅酶A测试盒

乙酰辅酶A测试盒

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参数规格：

产品资料：

试剂一：液体 100mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存。临用前加入 250μL试剂五充分溶解备用。 试剂三：液体×1支，4℃保存。临用前加入 250μL试剂五充分溶解备用。 试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加入 22.5mL试剂五充分溶解备用。 试剂五：液体 30mL×1瓶，4℃保存。 工作液的配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数× 0.23 m L），将试剂二、三和四按照 1:1:90的比例混合，或者直接把试剂二和试剂三加入到试剂四中混匀（可以测定 96样）；加样前置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴锅中预热 30 min。

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工作原理：
苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和 NAD生成草酰乙酸和 NADH。柠檬酸合酶可催化乙酰辅酶 A和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶 A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反应，乙酰辅酶 A含量和 NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反应了乙酰辅酶 A含量的高低。

测定意义：
乙酰辅酶 A广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。是生物体能源物质代谢过程中产生的一种重要的中间代谢产物。在体内能源物质代谢中是一个枢纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶 A汇聚成一条共同的代谢通路 -三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路*氧化生成二氧化碳和水，释放能量用于 ATP合成。此外，乙酰辅酶A是合成脂肪酸，酮体，胆固醇及其衍生物等生理活性物质的前体物质。

标本处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1mL试4剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g组织，加入 1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

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合作单位：NAD-苹果酸酶（NAD-ME）测试盒

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